በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የቁጥር ትንተና መርሆዎች እና ዘዴዎች

የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የመለየት ዘዴ ለሁለቱም ደረጃዎች ድብልቅ ውስጥ ባሉት ክፍሎች መካከል ባለው ልዩነት ላይ የተመሠረተ ነው።

እንደ ተለያዩ የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች፣ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ወደ ፈሳሽ-ጠንካራ ክሮማቶግራፊ፣ ፈሳሽ-ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ እና የተሳሰረ ምዕራፍ ክሮማቶግራፊ ይከፈላል።በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉት ፈሳሽ-ጠንካራ ክሮማቶግራፊ ከሲሊካ ጄል እንደ መሙያ እና ከማይክሮሲሊካ ጋር እንደ ማትሪክስ የታሰረ ደረጃ ክሮማቶግራፊ ናቸው።

እንደ ቋሚ ደረጃ, ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ወደ አምድ ክሮማቶግራፊ, የወረቀት ክሮማቶግራፊ እና ቀጭን ንብርብር ክሮሞግራፊ ሊከፋፈል ይችላል.በ adsorption አቅም መሰረት, በ adsorption chromatography, partition chromatography, ion exchange chromatography እና gel permeation chromatography ሊከፈል ይችላል.

በቅርብ ዓመታት ውስጥ ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ፍሰት ስርዓት ወደ ፈሳሽ አምድ ክሮማቶግራፊ ስርዓት ተጨምሯል የሞባይል ደረጃ በፍጥነት በከፍተኛ ግፊት እንዲፈስ በማድረግ የመለያውን ውጤት ለማሻሻል ከፍተኛ ብቃት (በተጨማሪም ከፍተኛ ግፊት በመባልም ይታወቃል) ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ብቅ ብሏል።

ክፍል
01 የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የቁጥር ትንተና መርህ

በጥራት መሰረት ለመለካት ንጹህ ንጥረ ነገሮች እንደ መመዘኛዎች ያስፈልጋሉ;

የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መለኪያ በአንጻራዊነት የቁጥር ዘዴ ነው-ይህም ማለት በድብልቅ ውስጥ ያለው የትንታኔ መጠን ከሚታወቅ ንጹህ መደበኛ ናሙና ይገመታል.

ክፍል
02 በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ለመለካት መሰረት

የሚለካው ክፍል (W) መጠን ከምላሽ ዋጋ (A) (የጫፍ ቁመት ወይም ከፍተኛ ቦታ) ጋር ተመጣጣኝ ነው፣ W=f×A።

የቁጥር ማስተካከያ ምክንያት (ረ)፡- የቁጥር ስሌት ቀመር ተመጣጣኝነት ቋሚ ነው፣ እና አካላዊ ትርጉሙ በክፍል ምላሽ እሴት (ከፍተኛ ቦታ) የሚወከለው የሚለካው ክፍል መጠን ነው።

የቁጥር ማስተካከያ መለኪያው ከሚታወቀው የመደበኛ ናሙና መጠን እና የምላሽ ዋጋ ሊገኝ ይችላል.

ያልታወቀ አካል የምላሽ ዋጋን ይለኩ, እና የክፍሉ መጠን በቁጥር ማስተካከያ ምክንያት ሊገኝ ይችላል.

ክፍል
03 የተለመዱ ቃላት በቁጥር ትንተና

ናሙና (ናሙና)፡ ለ chromatographic ትንተና ትንታኔ የያዘ መፍትሄ።ወደ መደበኛ እና የማይታወቁ ናሙናዎች ተከፋፍሏል.

መደበኛ: የታወቀ ትኩረት ያለው ንጹህ ምርት.ያልታወቀ ናሙና (ያልታወቀ)፡ ትኩረቱ የሚሞከርበት ድብልቅ።

የናሙና ክብደት፡ የሚመረመረው የናሙና የመጀመሪያው ሚዛን።

ዳይሉሽን፡ ያልታወቀ ናሙና የመሟሟት ሁኔታ።

አካል፡- በቁጥር ሊተነተን የሚገባው የክሮማቶግራፊ ጫፍ፣ ያም ይዘቱ የማይታወቅ ተንታኝ ነው።

የመለዋወጫ መጠን (መጠን)፡ የሚመረመረው ንጥረ ነገር ይዘት (ወይም ትኩረት)።

ኢንተጀሪቲ፡ የክሮማቶግራፊ ጫፍ ጫፍ አካባቢ በኮምፒውተር የሚለካበት ስሌት ሂደት።

የካሊብሬሽን ከርቭ፡ የመለዋወጫ ይዘት እና የምላሽ ዋጋ መስመራዊ ኩርባ፣ ከታወቀ መደበኛ ንጥረ ነገር መጠን የተመሰረተ፣ የማይታወቅ የትንታኔውን ይዘት ለማወቅ ይጠቅማል።

ክፍል
04 የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መጠናዊ ትንተና

1. ለቁጥራዊ ትንተና ተስማሚ የሆነ ክሮማቶግራፊ ዘዴ ይምረጡ፡-

l የተገኘውን ክፍል ጫፍ ያረጋግጡ እና ከ 1.5 በላይ የሆነ ጥራት (R) ይድረሱ

l የተሞከሩትን ክፍሎች የ chromatographic ጫፎች ወጥነት (ንፅህናን) ይወስኑ

l ዘዴውን የመለየት ገደብ እና የመጠን ገደብ መወሰን;ትብነት እና መስመራዊ ክልል

2. የተለያየ መጠን ካላቸው መደበኛ ናሙናዎች ጋር የካሊብሬሽን ኩርባ ያዘጋጁ

3. የቁጥር ዘዴዎችን ትክክለኛነት እና ትክክለኛነት ያረጋግጡ

4. የናሙና አሰባሰብን፣ መረጃን ማቀናበር እና ውጤቶችን ሪፖርት ለማድረግ ተጓዳኝ ክሮሞግራፊ አስተዳደር ሶፍትዌርን ተጠቀም

ክፍል
05 የቁጥር ጫፎችን መለየት (ጥራት)

ለመለካት እያንዳንዱን የክሮማቶግራፊ ጫፍ በጥራት ለይ

በመጀመሪያ ደረጃ ለመለካት የክሮሞግራፊ ጫፍ የማቆያ ጊዜ (Rt) ለመወሰን መደበኛውን ናሙና ይጠቀሙ።የማቆያ ጊዜውን በማነፃፀር፣ በማይታወቅ ናሙና ውስጥ ከእያንዳንዱ ክሮማቶግራፊ ጫፍ ጋር የሚዛመደውን አካል ያግኙ።ክሮማቶግራፊ የጥራት ዘዴ የማቆያ ጊዜውን ከመደበኛ ናሙና ጋር ማወዳደር ነው።መስፈርቱ በቂ ያልሆነተጨማሪ ማረጋገጫ (ጥራት ያለው)

1. መደበኛ የመደመር ዘዴ

2. ሌሎች ዘዴዎችን በተመሳሳይ ጊዜ ይጠቀሙ፡- ሌሎች ክሮማቶግራፊያዊ ዘዴዎች (ስልቱን መቀየር ለምሳሌ፡ የተለያዩ ክሮማቶግራፊያዊ አምዶችን በመጠቀም)፣ ሌሎች ፈላጊዎች (PDA፡ ስፔክትረም ንፅፅር፣ የስፔክትረም ቤተ መፃህፍት ፍለጋ፣ MS፡ mass spectrum analysis፣ spectrum library search)

3. ሌሎች መሳሪያዎች እና ዘዴዎች

ክፍል
06 የቁጥር ጫፍ ወጥነት ማረጋገጫ

ክሮማቶግራፊ ከፍተኛ ወጥነት (ንፅህና) ያረጋግጡ

በእያንዳንዱ የክሮማቶግራፊ ጫፍ ስር አንድ የሚለካ አካል ብቻ እንዳለ ያረጋግጡ

ከተባባሪ ንጥረ ነገሮች (ቆሻሻዎች) የሚመጡ ጣልቃገብነቶችን ያረጋግጡ

የ Chromatographic ጫፍ ወጥነት (ንፅህና) ማረጋገጫ ዘዴዎች

Spectrogramsን ከ Photodiode Matrix (PDA) መፈለጊያዎች ጋር ማወዳደር

የፒክ ንፅህና መለያ

2996 የንፅህና አንግል ቲዎሪ

በPART 07 በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉ የቁጥር ዘዴዎች

መደበኛ ከርቭ ዘዴ፣ ወደ ውጫዊ መደበኛ ዘዴ እና የውስጥ መደበኛ ዘዴ የተከፋፈለ፡

1. ውጫዊ መደበኛ ዘዴበፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ ይውላል

የታወቁ ስብስቦች ተከታታይ መደበኛ ናሙናዎች እንደ መደበኛ ናሙናዎች ለመፈተሽ ውህዶች ንጹህ ናሙናዎችን በመጠቀም ተዘጋጅተዋል.በአምዱ ውስጥ እስከ የምላሽ እሴቱ (ከፍተኛ ቦታ) ውስጥ ገብቷል።
በተወሰነ ክልል ውስጥ, በመደበኛ ናሙና እና በምላሹ እሴት መካከል ጥሩ የመስመር ግንኙነት አለ, ማለትም W= f × A , እና መደበኛ ኩርባ ይሠራል.

በተመሳሳዩ የሙከራ ሁኔታዎች ውስጥ የሚለካውን ክፍል የምላሽ ዋጋ ለማግኘት ያልታወቀ ናሙና ያውጡ።በሚታወቀው ኮፊሸን f መሰረት, የሚለካው የንጥረቱ ክምችት ሊገኝ ይችላል.

የውጫዊ መደበኛ ዘዴ ጥቅሞች:ቀላል ቀዶ ጥገና እና ስሌት, በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውለው የመጠን ዘዴ ነው;እያንዳንዱ አካል እንዲታወቅ እና እንዲገለበጥ አያስፈልግም;መደበኛ ናሙና ያስፈልጋል;የመደበኛ ናሙና እና ያልታወቀ ናሙና የመለኪያ ሁኔታዎች ወጥነት ሊኖራቸው ይገባል.የክትባት መጠን በትክክል መሆን አለበት.

የውጫዊ መደበኛ ዘዴ ጉዳቶችየሙከራ ሁኔታዎች ከፍተኛ መሆን ይጠበቅባቸዋል, ለምሳሌ የመመርመሪያው ስሜታዊነት, የፍሰት መጠን እና የሞባይል ደረጃ ስብጥር ሊለወጥ አይችልም;የእያንዳንዱ መርፌ መጠን ጥሩ የመድገም ችሎታ ሊኖረው ይገባል.

2. የውስጥ መደበኛ ዘዴትክክለኛ ፣ ግን ችግር ያለበት ፣ በብዛት በመደበኛ ዘዴዎች ጥቅም ላይ ይውላል

የተደባለቀ ደረጃን ለማዘጋጀት የታወቀ የውስጣዊ ደረጃ መጠን ወደ መደበኛው ተጨምሯል እና የታወቁ ትኩረትን ተከታታይ የስራ ደረጃዎች ይዘጋጃሉ።በድብልቅ ስታንዳርድ የስታንዳርድ እና የውስጥ ደረጃ የሞላር ሬሾ ሳይለወጥ ይቆያል።ወደ ክሮማቶግራፊ አምድ ውስጥ ያስገቡ እና (መደበኛ ናሙና ከፍተኛ ቦታ/የውስጥ መደበኛ ናሙና ጫፍ አካባቢ) እንደ የምላሽ ዋጋ ይውሰዱ።በምላሽ ዋጋ እና በስራ ደረጃው ትኩረት መካከል ባለው ቀጥተኛ ግንኙነት መሠረት W= f × A ፣ መደበኛ ኩርባ ይሠራል።

የሚለካውን ክፍል የምላሽ ዋጋ ለማግኘት የሚታወቅ የውስጥ መለኪያ መጠን ወደማይታወቅ ናሙና ተጨምሮ ወደ አምዱ ውስጥ ገብቷል።በሚታወቀው ኮፊሸን f መሰረት, የሚለካው የንጥረቱ ክምችት ሊገኝ ይችላል.

የውስጥ መደበኛ ዘዴ ባህሪያት:በቀዶ ጥገናው ወቅት ናሙናው እና የውስጥ መለኪያው አንድ ላይ ተቀላቅለው ወደ ክሮሞቶግራፊክ አምድ ውስጥ እንዲገቡ ይደረጋሉ, ስለዚህም የሚለካው ክፍል መጠን እና በተቀላቀለው መፍትሄ ውስጥ ካለው ውስጣዊ መለኪያ ጋር ያለው ጥምርታ ቋሚ እስከሆነ ድረስ, የናሙናውን መጠን መቀየር. በቁጥር ውጤቶች ላይ ተጽዕኖ አይኖረውም..የውስጣዊው መደበኛ ዘዴ የናሙናውን ተፅእኖ ያካክላል የድምጽ መጠን , እና ሌላው ቀርቶ የሞባይል ደረጃ እና ጠቋሚው, ስለዚህ ከውጫዊ መደበኛ ዘዴ የበለጠ ትክክለኛ ነው.

ክፍል
የቁጥር ትንተና ውጤቶች ላይ ተጽዕኖ የሚያሳድሩ 08 ምክንያቶች

ደካማ ትክክለኛነት በሚከተሉት ምክንያቶች ሊከሰት ይችላል-

ትክክል ያልሆነ የፒክ አካባቢ ውህደት፣ ናሙና በሚዘጋጅበት ጊዜ የናሙና መበስበስ ወይም ቆሻሻዎች፣ ናሙና ያልታሸገው የናሙና እቃ፣ የናሙና ወይም የማሟሟት መለዋወጥ፣ የተሳሳተ የናሙና ዝግጅት፣ የናሙና መርፌ ችግሮች፣ የተሳሳተ የውስጥ ደረጃ ዝግጅት

ለደካማ ትክክለኛነት ሊሆኑ የሚችሉ ምክንያቶች

ትክክል ያልሆነ ከፍተኛ ውህደት፣ መርፌ ወይም መርፌ ችግሮች፣ ናሙና መበስበስ ወይም ናሙና በሚዘጋጅበት ጊዜ የሚመጡ ቆሻሻዎች፣ ክሮማቶግራፊ ችግሮች፣ የተዋረደ ጠቋሚ ምላሽ